三、人類對(duì)干細(xì)胞的夢(mèng)想已首先在東方實(shí)現(xiàn)
作者:徐榮祥 出版社:中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社 發(fā)行日期:2009年7月 1.僅用經(jīng)驗(yàn)性的理論對(duì)燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)作出解釋是不夠的。
20世紀(jì)90年代初,徐榮祥完成的燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)在燒傷臨床治療醫(yī)學(xué)領(lǐng)域掀起了一場(chǎng)風(fēng)暴。他的醫(yī)療技術(shù)徹底地改變了燒傷治療醫(yī)學(xué)的現(xiàn)狀,通過使用他獨(dú)創(chuàng)的藥物MEBO和濕性療法,即使是重度燒傷,患者的創(chuàng)面也能實(shí)現(xiàn)無疤痕愈合。
革命性的治療效果對(duì)傳統(tǒng)的以燒傷外科為基礎(chǔ)的燒傷技術(shù)產(chǎn)生了強(qiáng)烈的震撼。徐榮祥和他的醫(yī)療技術(shù)成為傳統(tǒng)燒傷醫(yī)學(xué)爭(zhēng)論的焦點(diǎn)。一些學(xué)者否定濕性醫(yī)療技術(shù),指責(zé)徐榮祥是騙子,其所謂的醫(yī)療技術(shù)是騙術(shù)。而另一些學(xué)者則不僅把濕性醫(yī)療技術(shù)看成是燒傷醫(yī)學(xué)的最高成就,自己也成為濕性醫(yī)療技術(shù)積極的鼓吹者和實(shí)踐者。
同樣都是傳統(tǒng)燒傷外科的學(xué)者,針對(duì)同樣一個(gè)技術(shù),態(tài)度和立場(chǎng)截然相反,針鋒相對(duì),這是為什么?
反對(duì)者所以反對(duì),支持者所以支持,實(shí)際上,都與一個(gè)核心問題相聯(lián)系,那就是基理。
反對(duì)者在看待和評(píng)價(jià)濕性技術(shù)時(shí),是從經(jīng)驗(yàn)出發(fā),以傳統(tǒng)的理論作為依據(jù)的。按照傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn),受損傷的皮膚組織除表皮可以自行生理性愈合而不留疤痕外,深層皮膚是不可能自行生理性愈合不留疤痕的。傳統(tǒng)的理論為這一經(jīng)驗(yàn)提供了解釋,表皮皮膚創(chuàng)傷可以愈合是因?yàn)楸砥び谢赘杉?xì)胞存在,當(dāng)表皮受損,基底干細(xì)胞會(huì)自然啟動(dòng),分化形成組織,并最終完成損傷皮膚的修復(fù)。即便皮膚未受損傷,正常的表皮組織代謝也需要產(chǎn)生新的組織以替代舊的組織,這一過程也是由基底干細(xì)胞自然完成的。基底干細(xì)胞主要位于表皮層,真皮層也有少量存在,因此,一旦燒傷深及表皮下的真皮、脂肪層或肌肉層,表皮的修復(fù)就不再可能,原因很簡(jiǎn)單,那里沒有干細(xì)胞。根據(jù)這一既有的理論,一些學(xué)者自信地得出結(jié)論:隨便徐榮祥瞎吹,治好了這個(gè),治好了那個(gè),肯定是假的,不符合生命規(guī)律的事情,誰也辦不到!
盡管經(jīng)歷了近十年的發(fā)展,利用濕性醫(yī)療技術(shù)救治成功的病人累計(jì)已近上百萬,這一實(shí)際存在的現(xiàn)實(shí)卻仍不足以改變持反對(duì)意見者的態(tài)度。不能怨人食古不化,也不能怨人冥頑不化,問題在于基礎(chǔ)理論方面。在分子醫(yī)學(xué)的時(shí)代,人們已經(jīng)能夠在分子水平上對(duì)一些影響生命的現(xiàn)象的規(guī)律作出更深刻更精確的描述,而濕性醫(yī)療技術(shù)仍僅僅通過在治療學(xué)方面總結(jié)出的一些經(jīng)驗(yàn)性的理論來解釋燒傷濕性醫(yī)療技術(shù),這顯然是不夠的。
不過,在支持徐榮祥濕性醫(yī)療技術(shù)的學(xué)者那里,他們卻為濕性醫(yī)療技術(shù)受到的指責(zé)抱不平。從現(xiàn)實(shí)出發(fā),在這些學(xué)者眼里,事實(shí)是第一位的,理論是第二位的。徐榮祥濕性醫(yī)療技術(shù)的貢獻(xiàn)絕不單純是將燒傷醫(yī)學(xué)提高到一個(gè)前所未有的水平,更重要的是他通過自己的醫(yī)學(xué)實(shí)踐揭示了一種現(xiàn)象,即深度損傷的皮膚也是可以實(shí)現(xiàn)生理性愈合的。這不僅是治療醫(yī)學(xué)的革命,更是人類認(rèn)識(shí)的一場(chǎng)革命。如果沒有濕性醫(yī)療技術(shù),人類對(duì)于有關(guān)皮膚組織生長(zhǎng)的認(rèn)識(shí)不要說在本質(zhì)上有多深刻,就是在現(xiàn)象上也是不全面的。
對(duì)于濕性醫(yī)療技術(shù),理論上講不清,并不是濕性醫(yī)療技術(shù)的錯(cuò),而恰恰是傳統(tǒng)的理論隨著新的現(xiàn)象的出現(xiàn),已不能滿足現(xiàn)實(shí)的需要,現(xiàn)實(shí)要求它必須積極地正視現(xiàn)實(shí),迎接挑戰(zhàn),面臨更新。一些敏感的學(xué)者強(qiáng)烈地感到啟動(dòng)濕性醫(yī)療技術(shù)基理方面的研究已迫在眉睫,勢(shì)在必行,同時(shí)他們也感悟到濕性醫(yī)療技術(shù)基理的研究對(duì)未來的影響,不會(huì)單純地局限在燒傷醫(yī)學(xué)的領(lǐng)域,它的效應(yīng)可能會(huì)是一場(chǎng)核裂變,波及整個(gè)醫(yī)學(xué),深及未來的生命科學(xué)。這或許也就是巴巴拉和高登兩位美國(guó)學(xué)者用諾貝爾獎(jiǎng)作尺度來衡量其研究?jī)r(jià)值的真實(shí)原因!
對(duì)于濕性醫(yī)療技術(shù)基理的研究,他的發(fā)明者徐榮祥更是孜孜以求。在濕性醫(yī)療技術(shù)誕生后,徐榮祥在進(jìn)一步完善技術(shù)的同時(shí),便開始了燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)所實(shí)現(xiàn)的損傷皮膚無疤痕愈合基理方面的研究,其探索的努力也從未停止過。早在1989年,在徐榮祥創(chuàng)辦的《中國(guó)燒傷創(chuàng)瘍》雜志的創(chuàng)刊號(hào)中,他和他的研究者就刊登文章研究在光學(xué)顯微鏡下觀察到的皮膚細(xì)胞表現(xiàn)特殊的生長(zhǎng)情況。大規(guī)模地開展研究則是從1991年的最后一個(gè)季度開始的。
2.干細(xì)胞大兵團(tuán)遠(yuǎn)征計(jì)劃中途夭折
1991年10月25日,美國(guó)新澤西??先t(yī)療中心著名燒傷醫(yī)學(xué)專家巴巴拉打來國(guó)際長(zhǎng)途,興奮地向徐榮祥通報(bào)了他對(duì)燒傷濕性治療技術(shù)的核心藥物BC4D 進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)研究的情況。以下是當(dāng)時(shí)電話記錄的摘要:
1990年12月你來美訪問,臨走時(shí),交給我的關(guān)于MEBO研究,經(jīng)過一年的實(shí)驗(yàn),終于有了結(jié)果,你留下的MEBO共進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn),結(jié)果很令人滿意。
第一個(gè)實(shí)驗(yàn)是利用MEBO進(jìn)行了體外細(xì)胞的培養(yǎng)研究。簡(jiǎn)單說,實(shí)驗(yàn)方法如下:用兩組試管,均裝有細(xì)胞培養(yǎng)液并放入上皮細(xì)胞,然后在其中一組中的試管液內(nèi)放入MEBO,而另一組不放入MEBO,進(jìn)行對(duì)比細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果是非常令人吃驚的。發(fā)現(xiàn)在放入MEBO的試管中,其上皮細(xì)胞變?yōu)榛讓蛹?xì)胞,且生長(zhǎng)速度非??欤涓咚偕L(zhǎng)的基底層細(xì)胞在質(zhì)量上均是成熟的。這一切我們均利用較精密的儀器進(jìn)行了測(cè)量。這樣的結(jié)果是在國(guó)際上的重大突破。在世界上,任何藥物均不能出現(xiàn)此結(jié)果!
第二個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:將成塊真皮放入細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)殘留在真皮內(nèi)的殘存毛囊腺上皮及毛囊腺在MEBO的作用下,再生速度非??欤偕龅拿蚁?、毛囊器的形態(tài)與正常原有的相同。這一切變化均是通過顯微鏡而直接觀察到的。對(duì)這樣的變化,以前人們?cè)鶕?jù)毛囊的再生規(guī)律預(yù)想過,但因毛囊上皮生長(zhǎng)速度極為緩慢,從沒有人能描述,更不能直接觀察到毛囊再生的情況,而使用MEBO后,毛囊腺上皮再生速度明顯加快,人們可直接觀察到。這是一個(gè)重要的國(guó)際性突破。
第三,關(guān)于分子生物學(xué)的研究結(jié)果:我們對(duì)使用MEBO后的組織細(xì)胞的再生基因工程進(jìn)行了研究,通過實(shí)驗(yàn)儀器對(duì)RNA、DNA合成了測(cè)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明:使用MEBO后,其中的DNA、RNA的數(shù)量大量增加,說明細(xì)胞的分裂速度較快。這一結(jié)果和以上所報(bào)告的結(jié)果都是極為重要的,在世界上也從來沒有人做過此項(xiàng)試驗(yàn),也從來沒有獲得這樣的結(jié)果。
這些結(jié)果對(duì)美國(guó)FDA通過MEBO進(jìn)入美國(guó)市場(chǎng)也有著更重要的作用。這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)是在美國(guó)FDA認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行的,是完全可信的,更何況此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)是FAD撥款的。
盡管巴巴拉描述的這些實(shí)驗(yàn)中的一些實(shí)驗(yàn),徐榮祥已經(jīng)做過,但是從大洋彼岸傳來的信息還是使徐榮祥產(chǎn)生了一種競(jìng)爭(zhēng)世界科學(xué)最前沿的緊迫感。放下電話,徐榮祥匆忙整理完材料,便直奔衛(wèi)生部科技司,向有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)作了匯報(bào),并提議由國(guó)家主持正式全面啟動(dòng)濕性醫(yī)療技術(shù)有關(guān)基理的研究。徐榮祥的建議立即得到衛(wèi)生部科技司和部主要領(lǐng)導(dǎo)的高度重視。
1991年10月30日,在衛(wèi)生部科技司召集和主持下,一個(gè)由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院和北京醫(yī)科大學(xué)等權(quán)威醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的基礎(chǔ)研究專家參加的大型學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)在首都賓館舉行。會(huì)上,徐榮祥向基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)專家詳細(xì)地介紹了燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)對(duì)燒傷皮膚組織實(shí)現(xiàn)生理性修復(fù)所起到的特殊功效,并提出了基礎(chǔ)研究所要研究的課題。這些課題包括:一、汗腺上皮再生表皮,二、真皮及附件完全再生,三、DNA高速變化規(guī)律。
徐榮祥的報(bào)告激活了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)專家的神經(jīng),僅僅一個(gè)月,近五十名著名的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)專家提交了落實(shí)研究的詳細(xì)課題設(shè)計(jì),直接參加這項(xiàng)研究的科研人員多達(dá)150人。當(dāng)厚厚的課題報(bào)告書堆滿了案頭的時(shí)候,徐榮祥仿佛進(jìn)入了遠(yuǎn)古的英雄時(shí)代,他像史詩中的英雄一樣真實(shí)而深切地感受到了一場(chǎng)世紀(jì)之戰(zhàn)的恢宏。
多么雄渾激越的時(shí)代,多么催人奮進(jìn)的計(jì)劃,多么激動(dòng)人心的研究!
正當(dāng)圍繞揭示皮膚細(xì)胞生長(zhǎng)規(guī)律而展開的大兵團(tuán)作戰(zhàn)的英雄史詩的帷幕即將拉開的時(shí)候,徐榮祥突然受到了來自傳統(tǒng)燒傷醫(yī)學(xué)最猛烈的沖擊。
盡管在衛(wèi)生部的關(guān)懷下,在國(guó)務(wù)院的支持下,徐榮祥躲過了劫難,沒有被狂風(fēng)暴雨所襲倒,但是他剛剛組織起來的遠(yuǎn)征軍卻被支解得七零八落。在以后的日子里,抨擊與反抨擊、調(diào)查與被調(diào)查、陷害與反陷害的角逐構(gòu)成了徐榮祥人生中一段復(fù)雜而險(xiǎn)越的經(jīng)歷。為了挺直燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)稚嫩的身軀,他不得不卷入一場(chǎng)求生的斗爭(zhēng),皮膚組織細(xì)胞學(xué)的研究計(jì)劃被迫暫時(shí)埋藏在了心靈的最深處。
1994年底,徐榮祥的命運(yùn)引起剛剛走馬上任的衛(wèi)生部新任副部長(zhǎng)張文康的關(guān)注,他找到徐榮祥,關(guān)切地詢問了濕性醫(yī)療技術(shù)有關(guān)基理的研究情況。當(dāng)?shù)弥鞓s祥的研究因?qū)W術(shù)紛爭(zhēng)而裹足不前時(shí),張文康當(dāng)即果斷地指示,研究工作不能中止,衛(wèi)生部將努力創(chuàng)造良好的環(huán)境,支持徐榮祥的研究。
躲過了寒冬的徐榮祥,倍感春天的溫暖。1995年5月22日,通過中央電視臺(tái)的《新聞聯(lián)播》,徐榮祥向社會(huì)公布了啟動(dòng)皮膚干細(xì)胞的研究計(jì)劃。
3.鎖定合成人類角蛋白19型細(xì)胞
沒有大規(guī)模的兵團(tuán),沒有聲勢(shì)浩大的儀式,僅僅帶領(lǐng)了一支不到十人的隊(duì)伍,徐榮祥神秘地從公眾媒體上銷聲匿跡。1996年4月1日,他帶領(lǐng)著自己的研究小組離開北京,驅(qū)車直奔有大量正在接受濕性醫(yī)療技術(shù)治療的重度燒傷病人的湖北襄樊,開始了他有關(guān)皮膚再生基理的細(xì)胞學(xué)臨床與基礎(chǔ)密切結(jié)合的研究。
徐榮祥這一次開展研究同5年前組織大兵團(tuán)時(shí)在思路發(fā)生了很大的變化。5 年來為求生存而展開的斗爭(zhēng)固然耽誤了許多寶貴的時(shí)間,但是時(shí)間也使徐榮祥的思想得到了一次沉淀的機(jī)會(huì)。從對(duì)細(xì)胞的狂熱到冷靜,時(shí)間濾去了一些浮躁的表皮的虛像,而使得隱秘的本質(zhì)的聯(lián)系漸漸地凸顯出思維的平臺(tái)。
5年間,徐榮祥并未停止對(duì)皮膚組織再生基理的思考,最初這些思考呈現(xiàn)為一種靈感式的迸發(fā)狀態(tài),思想的火花五彩繽紛,四處飛濺,豐富而零亂,仿佛急需開展的研究有很多很多,簡(jiǎn)直是五花八門,樣樣齊全,專家申報(bào)了50多個(gè)課題仍讓他感到不夠過癮。而隨著時(shí)間的推移,漸漸地,他的思想開始完全集中到了干細(xì)胞這唯一的目標(biāo)上。
他的思想被一個(gè)在細(xì)胞學(xué)上稱為角蛋白19型的干細(xì)胞牢牢地控制著。最初,并沒有通過邏輯性演繹縝密清晰的步驟,僅僅是一個(gè)靈感,一種直覺使他關(guān)注到這種細(xì)胞。他及時(shí)地捕捉住它,生怕它會(huì)從裂變的思維中消失。后來,通過理性的分析,在沒有得到實(shí)驗(yàn)證實(shí)之前,他就已作出了超前的判斷:完成深度損傷皮膚生理性修復(fù)的基礎(chǔ)物質(zhì)很可能就是人類角蛋白19型這種干細(xì)胞。這一判斷一經(jīng)作出,他的大腦就被完全鎖定了,幾乎到了想掙脫都沒辦法掙脫的地步。
早在1989年,徐榮祥就通過光學(xué)顯微鏡直接觀察到燒傷的皮膚組織在接受MEBO這一藥物治療后細(xì)胞組織出現(xiàn)的特異性變化。這和巴巴拉在體外觀察的結(jié)果是相同的。在施用了MEBO之后,燒傷創(chuàng)面上增生了許多細(xì)胞,這些細(xì)胞聚集在一起形成了一個(gè)群狀的細(xì)胞團(tuán)。這樣的變化在沒有用藥的創(chuàng)面上是根本見不到的。當(dāng)徐榮祥把這樣的組織切片送到解放軍總醫(yī)院細(xì)胞室進(jìn)行觀察的時(shí)候,權(quán)威的細(xì)胞學(xué)專家不禁驚嘆:“這是什么組織,燒傷的皮膚創(chuàng)面怎么會(huì)有胚胎組織類型的細(xì)胞!”
根據(jù)已知的基礎(chǔ)研究提供的有關(guān)皮膚組織細(xì)胞的知識(shí),徐榮祥知道已探明的皮膚分化程度不同的表皮細(xì)胞含有5種類型的角蛋白:合成人角蛋白1型、10型、9型、16型和19型。這些不同類型的細(xì)胞其功能表達(dá)各不相同。合成1型和10型角蛋白的細(xì)胞是生成較硬皮質(zhì)的細(xì)胞,它是成熟的表皮細(xì)胞,其分化增生的功能已接近完結(jié);合成角蛋白9型和16型的細(xì)胞是表皮干細(xì)胞移行過程中的中間型細(xì)胞,是可以分化形成合成1型和10型角蛋白的細(xì)胞,屬于有分化能力的未成熟細(xì)胞;而含角蛋白19型的細(xì)胞則是提供表皮再生的,分化能力最強(qiáng)的表皮干細(xì)胞。
完成人類皮膚的生長(zhǎng)和修復(fù),這些細(xì)胞在不同階段都起到了相應(yīng)的作用,但是它們中除了19型是最原始的類型外,其余的1型、10型、9型和16型都是中間階段的類型,它們本身就存在于表皮層,在表皮以下的組織中是不存在的。因此要實(shí)現(xiàn)深度燒傷皮膚修復(fù),這樣類型的細(xì)胞是力所難及的。唯一有可能的只有19型。
不過,要讓思維確信無疑地接受19型,并不是順理成章的事,中間仍然有思想障礙需要排除。因?yàn)?9型是胚胎細(xì)胞,也就是說根據(jù)已有的知識(shí),它只有在人剛剛由受精卵在子宮中發(fā)育成胚胎時(shí)才可以見到,隨著胚胎進(jìn)一步的發(fā)育,19型就會(huì)分化變成其他類型的細(xì)胞。如果要確定19型,那么,除非首先要在19型細(xì)胞可能出現(xiàn)的位置上實(shí)現(xiàn)突破,即在被認(rèn)為是不可能出現(xiàn)的地方,如表皮層、真皮層、脂肪層,甚至肌肉層中尋找到19型的蹤影;其次,就是跟蹤19型的變化規(guī)律,如果在深度燒傷皮膚愈合的過程中,能夠確定地追蹤到19型細(xì)胞分裂、增生,并有轉(zhuǎn)化為其他更為成熟的諸如1型、10型、9型和16型等類型的跡象的話,確定19型才可以說是板上釘釘?shù)亩ㄕ摗?BR> 4.拿下干細(xì)胞有如探囊取物
理論先行使實(shí)踐免走了很多的彎路,原來認(rèn)為需要瞄準(zhǔn)多個(gè)目標(biāo),進(jìn)行大規(guī)模協(xié)同作戰(zhàn)的戰(zhàn)略,現(xiàn)在變得沒有必要。現(xiàn)在的目標(biāo)非常明確:就是要直截了當(dāng)拿下合成人角蛋白19型細(xì)胞。原本要?jiǎng)佑们к娙f馬的巨工程被簡(jiǎn)化成僅僅只要一個(gè)科研小組就可以完成的工作。而這個(gè)科研小組所作的工作也被壓縮成兩個(gè)方面。一方面是嚴(yán)格監(jiān)督臨床治療的規(guī)范性,以便按照根據(jù)對(duì)照取樣需要設(shè)定的時(shí)間表,準(zhǔn)確地從患者創(chuàng)面獲取到可供基礎(chǔ)研究觀察的病理切片。另一方面是選擇最優(yōu)秀的實(shí)驗(yàn)室,用最先進(jìn)的細(xì)胞追蹤技術(shù),追蹤干細(xì)胞的變化規(guī)律。
正巧這時(shí)湖北襄樊有一批重度燒傷病人,他們?yōu)殚_展干細(xì)胞的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究提供了得天獨(dú)厚的機(jī)會(huì)。徐榮祥親自參與搶救和治療每一個(gè)病人,并指導(dǎo)研究人員按設(shè)計(jì)規(guī)范做病理切片。同時(shí),他還不得不時(shí)常趕回北京,與中國(guó)醫(yī)科大學(xué)的實(shí)驗(yàn)人員共同探討實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法。有一次,當(dāng)他回到北京,剛下飛機(jī)打開手機(jī),襄樊臨床基地的電話便追了過來。一位燒傷危重病人突然病危,臨床醫(yī)生處理不了。徐榮祥毫不遲疑,沒出機(jī)場(chǎng),立即又登上了返程的航班。就在當(dāng)?shù)蒯t(yī)生作出決定,準(zhǔn)備對(duì)這位病人放棄治療時(shí),他沖進(jìn)了病房。經(jīng)過他簡(jiǎn)單的處理,病人的危險(xiǎn)癥狀立即得以緩解。
北京方面的研究情況也曾出現(xiàn)過周折。最初,實(shí)驗(yàn)人員對(duì)切片進(jìn)行免疫熒光觀察時(shí),結(jié)果很不理想,在切片上,他們沒有發(fā)現(xiàn)有合成角蛋白19型的細(xì)胞。當(dāng)這樣的結(jié)果呈送到辦公桌上的時(shí)候,徐榮祥感到很意外,他根本不相信會(huì)是這種結(jié)果,因?yàn)樗麑?duì)19型很有信心。
無論從純理論的推斷,還是從實(shí)驗(yàn)觀察所使用的技術(shù)方面都很難找出缺陷,徐榮祥開始對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行分析,這時(shí)他發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果反映出的情況有些離譜,切片反映出的細(xì)胞狀態(tài)是發(fā)生傳代變異了的,而不是原始的。這說明取切片的方法可能存在問題。
回過頭來,重新檢討取切片的方法,徐榮祥發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生他推斷的那種可能性確實(shí)存在,于是他和驗(yàn)證課題組的成員中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和醫(yī)科大學(xué)的許增祿教授商議決定對(duì)切片進(jìn)行即時(shí)冷凍并置于液氮中保存。保存切片的方法一改變,實(shí)驗(yàn)觀察便迅即走上了一條通衢大道。
接下來的工作就是對(duì)切片進(jìn)行生物素抗生物素蛋白DCS體系間接免疫染色。生物素抗生物素蛋白DCS體系間接免疫染色是目前世界上最先進(jìn)的細(xì)胞染色技術(shù),它使目標(biāo)能夠通過熒光顯示得到特異性的標(biāo)識(shí),因而是追蹤細(xì)胞變化的理想手段。
首先,為了測(cè)定接受治療的燒傷皮膚組織中確實(shí)存在角蛋白19型細(xì)胞,研究者選用小鼠抗人角蛋白19型的單克隆抗體進(jìn)行測(cè)試。實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)正常皮膚與接受濕性醫(yī)療技術(shù)治療的燒傷皮膚進(jìn)行對(duì)照測(cè)試,以觀察二者有無特異反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果是理想的,研究者在正常皮膚組織中沒有發(fā)現(xiàn)有呈陽性反應(yīng)的角蛋白19型細(xì)胞,而在接受MEBO藥物治療的燒傷皮膚組織中,24小時(shí)后,發(fā)現(xiàn)有顯示熒光呈陽性反應(yīng)的角蛋白19型細(xì)胞。
其次,繼續(xù)觀察接受治療的燒傷組織細(xì)胞的變化情況。研究者發(fā)現(xiàn)治療后4天,在汗腺、毛細(xì)血管和毛囊周圍潛在的角蛋白19型細(xì)胞開始增多。治療后7—14天,角蛋白19型細(xì)胞的數(shù)量接近并達(dá)到峰值。至21天和28天這個(gè)時(shí)間段,角蛋白19型細(xì)胞的數(shù)量開始回落。這個(gè)觀察結(jié)果與燒傷皮膚接受治療的臨床及組織學(xué)研究結(jié)果正相吻合。
這項(xiàng)研究實(shí)現(xiàn)了研究者最初設(shè)定的目標(biāo),即確定角蛋白19型干細(xì)胞,追蹤其分化增生的規(guī)律。燒傷皮膚組織再生修復(fù)的基理終于顯出了端倪。
第一,通過這項(xiàng)研究證實(shí)了在殘存的燒傷組織中可產(chǎn)生人角蛋白19型這種最原始的胚胎類型的細(xì)胞;人角蛋白19型細(xì)胞數(shù)量上的變化說明人角蛋白19型細(xì)胞具有不斷分化和持續(xù)增殖的功能。
第二,從免疫熒光染色特異性表達(dá)的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)它在移動(dòng)和分裂后,能產(chǎn)生合成其他類型角蛋白1型和10型的細(xì)胞,這些細(xì)胞繼續(xù)分裂產(chǎn)生合成成熟表皮細(xì)胞所含的典型的角蛋白1型和10型的細(xì)胞,這充分說明人角蛋白19型細(xì)胞就是承擔(dān)燒傷皮膚組織再生修復(fù)的細(xì)胞。
第三,研究者還初步確定了人角蛋白19型細(xì)胞啟動(dòng)調(diào)控的規(guī)律。研究表明,細(xì)胞是從靜止期釋放出來的,首先被激活的周期蛋白是cyclin D,在受到生長(zhǎng)因子刺激后,它才表達(dá),真核生物在細(xì)胞的G1期決定進(jìn)入增生狀態(tài)還是退出周期,此時(shí)主要的調(diào)控者是周期蛋白cnclin D1/CDK4復(fù)合體,由此可以證實(shí)濕性醫(yī)療技術(shù)對(duì)干細(xì)胞分裂復(fù)制和再生具有啟動(dòng)和調(diào)控的特殊作用。
第四,研究中還尋找出了成纖維細(xì)胞、血管組織細(xì)胞及皮膚神經(jīng)細(xì)胞在皮膚再生過程中各自及相互間的持續(xù)增殖及形成皮膚的規(guī)律,其詳細(xì)成果研究者將陸續(xù)公布。
1998年4月,徐榮祥領(lǐng)導(dǎo)的科研小組旨在確定損傷皮膚生理性愈合基理的干細(xì)胞研究已初步完成,人類試圖利用干細(xì)胞治療臨床疾病的宏圖首先在古老的東方美夢(mèng)成真!